1、無菌室滅菌。每次使用前開啟紫外線燈照射30min以上，或在使用前30min，對內外室用5%石炭酸噴霧。
2、用肥皂洗手後，把所需器材搬入外室；在外室換上已滅菌的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然後用2%煤酚皂液將手浸洗2分鍾。
3、將各種需用物品搬進內室清點、就位，用5%石炭酸在工作台麵上方和操作員站位空間噴霧，返回外室，5～10min後再進內室工作。
4、接種操作前，用70%酒精棉球擦手；進行無菌操作時，動作要輕緩，盡量減少空氣波動和地麵揚塵。
5、工作中應注意安全。如遇棉塞著火，用手緊握或用濕布包裹熄滅，切勿用嘴吹，以免擴大燃燒；如遇有菌培養物灑落或打碎有菌容器時，應用浸潤5%石炭酸的抹布包裹後，並用浸潤5%石炭酸的抹布擦拭台麵或地麵，用酒精棉球擦手後再繼續操作。
6、工作結束，立即將台麵收拾幹淨，將不應在無菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無菌室後，對無菌室用5%石炭酸噴霧，或開紫外線燈照射30min。
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